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2021/06/29

ハイスループット発生毒性試験を、始めよう。

２０２１年１月２９日、医薬品規制調和国際会議(ICH)による医薬品の生殖発生毒性評価に係わるガイドライン(DETECTION OF REPRODUCTIVE AND DEVELOPMENTAL TOXICITY FOR HUMAN PHARMACEUTICAL S5(R3) )が医薬品医療機器総合機構(PMDA)により報告され、我が国でも本格的に代替法としてのゼブラフィッシュ発生毒性試験が開始されているが、始めることに慎重な人々が多いかもしれません。そこで、このゼブラフィッシュ発生毒性試験における最大の壁であるゼブラフィッシュ品質管理プロトコルの確立を試みた。まず世界で最も頻用されているゼブラフィッシュABラインを、米国ZIRCから入手した。そこで１２、９06個の受精卵を解析し、受精後３時間までに２９7個（２.３％）の受精卵が死亡した。この受精後３時間においてすでに２104個（１６.３％）に形態異常が認められた。その後受精後２４時間までに、４,６４６個（３６.0％）が死亡することが明らかとなった。しかしながら、この受精後１日後から６日後までの生存率は、６４.0％(1dpf)、６１.３％(2dpf)、５９.０％(6dpf)と、受精後２４時間までにおける急激な生存率低下に比較すると安定していることが認められた。一方、これら受精後３時間から６日後におけるタイムラプスイメージングを実施した結果、受精後３時間における受精卵異常イメージングにより、少なくとも受精後２４時間までの急激な死亡を予測できることが明らかとなり、受精後２４時間までの死亡予測能を強化するための診断基準を確立した。その結果、発生毒性試験のための化合物暴露開始(6hpf)前に、これらの低品質受精卵を除去することが可能となり、偽陽性頻度を抑制し、ゼブラフィッシュ発生毒性試験の精度を劇的に強化することが実現できたので、嬉しくなりご報告します。もし関心がありましたら、tanaka@doc.medic.mie-u.ac.jpへ、メールお願いします。